1. 目的：用于细胞和组织培养领域。

2. 适用范围：基础细胞生物学到航天生物学，干细胞培养以及再生医学和药物开发。

3. 简介：

Synthecon旋转细胞培养系统（RCCS）是一个能有效创造使人体和动物极其脆弱的细胞在复杂的三维组织模型内进行培养或共培养环境的先进仪器。这种培养模拟了其母体组织的结构与功能。

目前旋转细胞培养系统（RCCS）已被广泛用于医学/细胞学研究课题，例如生成高仿真的组织模型或者长期体外组织培养。产生分化的高密度的三维组织培养。膜氧合作用，赶走气泡，营造绝佳温和培养环境；在标准培养箱内运行，可以随时方便抽取样品；非常适合培育正常组织，肿瘤以及细菌/病毒浸染的组织模型。

4. 优点

微重力三维细胞组织培养技术，可以在体外模拟生物体内的环境，诱导细胞形成最类似体内组织的三维细胞集团，且可保持其体内各项生理病理特征指标。

三维细胞组织平台培养的细胞组织适于低成本大规模体外三维细胞扩增培养，可用于高通量药物筛选，长期/慢性药效及毒理测试，以及体外人体组织切片培养扩增等。

5. 使用操作步骤（以工程组织培养为例）

5.1 首先需要大规模扩增从体内分离获取的少量细胞，对于贴壁依赖性细胞，可使用常规的单层培养方法，传代培养后即可达到足够的数量。

5.2 将这些细胞种植在聚合物骨架上，通过对骨架的内部结构与表面性能的优化设计，在细胞-材料及细胞-细胞的相互作用下，诱导细胞进行分化。

5.3 采用灌注培养系统，维持稳定的环境条件，使工程组织维持长期的分化状态。

6. 注意事项

6.1 使用该仪器需购买GE公司的相关载体，载体有Cytodex 1.2.3三种，其中武汉瀚湖细胞有限公司使用的是Cytodex 3 微型球载体，价格：1500元/10 g。

6.2 在注入细胞之前，需对载体进行处理，放在96孔里处理，具体方法参考载体使用说明书。

6.3 注意在注入培养液时一定不能有气泡，最后一定要把气泡排干净。

6.4 培养器皿有一次性使用的耗材，也有可重复利用的耗材，选择性购买。

7. 维护与清洗

7.1 Cytodex-3的清洗与灭菌步骤：

7.1.1 称取浸泡

称取2 g微珠于一干净的250 ml烧杯中，加入一滴吐温-80和200 ml灭菌过的1×PBS，浸泡至少3小时。

7.1.2 冲洗

用巴氏滴管吸走上清液，用

1×PBS（100ml/g Cytodex-3）充分重悬，静置，吸走上清。重复操作三次。最后使微珠于1×PBS（75ml/g Cytodex-3）中重悬。

7.1.3 高温灭菌

将装有微珠的烧杯口，以锡箔纸封住，外面包以报纸，平稳的放入灭菌锅内，115 ℃，15 min。静置冷却至室温。

7.1.4分装保存

在超净工作台，先移走部分上清，然后用25 ml无菌移液管将微珠吸出，每次只吸4~5 ml，于两个50 ml无菌离心管中。用封口膜封住，于4 ℃冰箱内保存，待用。

7.1.5 使用前操作

在微珠使用前，应将微珠在37 ℃相应的培养液中充分重悬，并在37 ℃培养箱内静置过夜。

7.2 HARV的清洗与灭菌操作步骤

7.2.1 用螺丝刀将HARV的螺丝拧松，轻轻地将HARV分开，将液体注入和吸出通道的帽子拧下来，注入和吸出通道也拧出来。

7.2.2 将HARV所有的部分放在一个4L的大烧杯里面，加入温和的洗洁精。

7.2.3 用毛刷刷HARV塑料的部分，将上面的残留物质洗干净，特别是HARV的注入和吸出液体的通道要用小号的毛刷认真清洗。

7.2.4 用带了橡胶手套的指尖轻轻清洗通气膜（注意:不能用过大的力摩擦通气膜，以免损伤了膜。也千万不能用毛刷去刷通气膜。）

7.2.5 自来水将残留的洗洁精清洗掉，HARV的注入和吸出液体的通道要用自来水仔细冲洗。

7.2.6 超纯水漂洗HARV 4次左右，用干净的毛巾将水吸干。

7.2.7 将超纯水吸干净，把注入和吸出液体的通道的帽子泡在70%的酒精里面备用。HARV其余的部分用锡箔纸分别包好。

7.2.8 121℃，20min高压灭菌。

7.2.9 灭菌完，等冷却到室温之后，拿到超净台内组装。

7.2.10 HARV使用操作步骤：（以3T3例）

a. 将HARV组装好加入培养液浸润过夜

b. 将微珠在37 ℃相应的培养液中充分重悬，并在37 ℃培养箱内静置过夜

c. 传代至一个T75培养瓶和10 ml的三维仪

d. 将培养好的3T3计数以2.0*105的密度种入微珠在37℃培养箱培养，4h后观察细胞，贴微珠。

e. 将细胞移至到10ml的三维仪