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标准化流程与成功技术案例

PX2基因扩增仪操作流程

发布时间:2017-06-30 16:46:22    阅读次数:1186  

1. 上机前工作

1.1标本处理

参考DNA提取法,或者试剂盒说明书,测定模板浓度,备用。

1.2 PCR反应体系配制

根据试验要求选择上样体积及各项组分的浓度,常见上样体积:20μL 、25μL、 50μL 。

2.上机

2.1开机自检

2.2新建程序

2.2.1程序命名及仪器参数设置

主界面选择PROG →EDIT→ ENTER→ NEW→ ENTER→NEWPROG→选择储存位置 A-E盘→ENTER→程序命名(数字+字母)→ENTER 进入下一界面。

2.2.2预变性

STAGE 01

STEP 01→ 95℃(可变)→ ENTER →5 MIN(可变) →ENTER

STEP 02→ENTER→ ENTER(不进行编辑)

STEP 03 →CYCLE 1(循环次数可变,下同)→HOLD TEMP(不编辑)→ ENTER

2.2.3 PCR反应变性--退火--延伸三个基本循环反应步骤

STAGE 02

STEP 01→TEMP  95℃(可变)→ ENTER → TIME 30S(可变)→  ENTER

STEP 02→TEMP  56℃(可变)→ ENTER → TIME 30S(可变)→  ENTER

STEP 03→TEMP  72℃(可变)→ ENTER → TIME 30S(可变)→  ENTER

STEP 04→ENTER→ ENTER(不进行编辑)

STEP 05→CYCLE 35(可变)→HOLD TEMP(不编辑)→ ENTER

2.2.4 延伸

STAGE  03

STEP 01→TEMP  72℃(可变)→ ENTER →TIME 10min(可变)→  ENTER

STEP 02→ENTER→ ENTER(不进行编辑)

STEP 02→CYCLE 1(可变)→HOLD TEMP(编辑程序完成后的保存温度,一般4℃)→ ENTER

2.2.5 确认程序编辑完成

STAGE  04 不进行编辑,全部→ ENTER,进入下一个界面,结束程序编辑。

2.2.6 保存程序

在此界面保存程序选择SAVE,放弃或删除选择Discard

2.3 保存程序的编辑

主界面选择PROG →EDIT→ ENTER→EXISTING → ENTER→选择程序所在位置(A-E)盘 → 程序名称进行再编辑→ENTER→进入程序编辑界面,编辑方法同“2、新建程序” 完成后选择SAVE或Discard。

2.4运行程序

RUN→ 选择程序保存位置及名称(A-E盘)→ ENTER(3次)进入下一个界面→ 光标“ACTIVE  TUBE”位置通过Previous选择至 “BLOCK”→ENTER至下一个界面 →选择RUN开始运行程序,选择ABORT结束程序

2.5 取出样本,检查仪器后,关机,拔下电源。