一、日常管理工作：

1、准备工作：实验前，准备齐当天所用物品（包括废液缸），并配制2%新洁尔灭溶液（3000mL）及空盆于无菌间，开操作台和无菌室紫外灯30min。放臭氧15min后，再进无菌间操作。

2、无菌间操作：进入无菌间后换拖鞋、穿工作服、戴口罩、帽子、手套，然后用新洁尔灭洗手；将所用的试剂用新洁尔灭或75％酒精擦拭后放入操作台，撕封口膜，用酒精棉球擦拭瓶口，再在酒精灯火焰上烤，之后用止血钳夹住瓶塞取下；在操作台内，瓶口尽量不应直立向上，在盖塞前烤塞子与瓶口（除酒精棉球瓶外），再盖严加封口膜取出；做完实验，清理操作台，用新洁尔灭擦拭台面及操作台上的物品。

3、无菌间卫生：无菌室每周要彻底打扫一次，用新洁尔灭擦墙、门、仪器及桌面等；75%酒精擦窗、玻璃等；过氧乙酸擦操作台、出问题或准备要用的培养箱。

4、无菌服： 一次性使用的隔离服用完进行毒处理后再弃。

二、实验室物品处理：

1、新塞子的处理方法：新胶塞对细胞有一定的毒害作用，其处理方法为：新胶塞 →洗衣粉洗→洗涤灵洗→晾干→20g/1000mL的NaOH煮30min（沸腾起计时）→水冲洗→去离子水浸泡过夜→双蒸水冲洗→晾干→备用。

2、直接接触细胞用品的处理 用品→过氧乙酸浸泡过夜（20mL/10000mL过氧乙酸）→取出→洗涤灵擦洗→水冲→晾干→泡酸（洗液）→自来水浸泡过夜→去离子水冲洗→双蒸水冲洗→晾干→备用。

3、不直接接触细胞用品的处理 用品→自来水冲洗（可适当用洗衣粉或洗涤灵洗）→去离子水冲洗2～3次→双蒸水冲洗2～3次→晾干→包口→备用；滤器、瓶→自来水冲洗30min→去离子水冲洗→双蒸水冲洗→晾干→备用。

三、细胞污染时培养瓶及培养箱的处理：

1、细胞污染   细菌污染时培养基多出现浑浊，在镜下观察时多出现黑色跳动小点。真菌多为霉菌污染时，初期为镜下可见圆形漂浮或贴辅的空心圆泡，后期可见明显霉斑，镜下可见菌丝为树枝状。

2、处理：细菌多用新洁尔灭（20mL/1000mL水）可适当加大浓度，浸泡24h以上；真菌多用过氧乙酸（20mL/10000mL水）可适当加大浓度，浸泡24h以上。

3、培养箱处理：培养箱应拆下内部组件，彻底清洗，用过氧乙酸擦拭后再用新洁尔灭擦拭，然后用酒精擦拭，紫外照射30min，最后用75%的酒精（40℃，CO₂为零）培养箱内部熏蒸3～4h;污染严重时要将其放入烘箱内100～200℃烘3～4h安装后再照紫外。

4、培养间处理：要彻底打扫，擦拭，先用0.5%过氧乙酸擦一遍，大约10min后，用0.5%新洁尔灭再擦一遍，最后用过氧乙酸熏蒸消毒。方法为：向熏蒸槽内加入适量酒精，放上石棉网，取一个烧杯，加入100mL过氧乙酸和等量的蒸馏水，把烧杯放在石棉网，一起端进无菌室，并打开室内所有厨子和抽屉，点燃酒精开始熏蒸，中途可以检查酒精燃烧情况，如燃完可以视过氧乙酸剩余多少，再加入适量酒精，切忌烧干过氧乙酸。

四、其他注意事项：

1、进出无菌间，无论什么事，都必须带一次性手套开门。

2、血清、双抗等不能照紫外的试剂，直接带进无菌间后用酒精棉球擦拭三遍。

3、无菌间内装消毒液的桶、盆必须专用。

4、所用抹布，在做完实验后要洗涤、高压灭菌，烘干后照紫外，从传递柜带进无菌间，所有能灭菌的物品均以此方式处理。

5 、-70℃冰箱及液氮室钥匙由专人负责，除特殊情况，任何人不得随意拿用；平时也要先跟负责人请示。

6、实验操作分组时，各组使用各组的仪器设备，能分开用的要彻底分开。

7、为提高实验操作人员的关注程度，试验的每个步骤都要有相关纪录。

8、无论实验室有无污染，均要定期熏蒸，夏天一天一次，每次不必太长时间。

9、实验中遇到问题先查书、再找专家，切记勿盲目轻信。

10、在配制试剂时所用的水为去离子、三重蒸馏水，现用现制。

11、实验室内的试剂、相关工具等均有相应摆放位置，勿乱放，并按规定做好定期更新。

12、实验室内禁止带入任何食品。

13、在包滤器、滤瓶时，要包口，包一层牛皮纸之后，外面再包一层布，避免高压灭菌后进入过多水蒸汽。