1. 灭菌前准备

1.1. 溶氧电极准备：

旋开溶解氧电极透析膜，检查内部的电解液是否充足，如不充足，加满电解液，即旋紧透析膜时电解液会溢出即可。如透析膜表面有创伤，则须更换。

1.2. 校准pH电极：

将pH电极线路连接好，开机，准备好蒸馏水洗瓶、pH标准液（以PH值为4和7为例）。按功能键“F”进入pH功能，然后按菜单键“□”到显示Cal，按“＋”键选择2，取下电极保护套，将pH电极用蒸馏水清洗，再用滤纸吸干后，置于pH7的标准液中（电极不可与容器接触，电极的透析膜（小白点）须浸没在液面以下），按启动/停止键“⊙”进入校准过程。待pH示数稳定后按“＋”/“－”键调节数值至标准液的pH值，按启动/停止键“⊙”储存数值，此时左侧屏幕显示2，右侧显示REF，再将pH电极用蒸馏水清洗在用滤纸吸干后，置于pH4的标准液中，按启动/停止键“⊙”，待pH示数稳定后按“＋”/“－”键调节数值至标准液的pH值，按启动/停止键“⊙”储存数值。此时仪器会显示End，pH校准完成。

1.3. 加培养基

取出温度传感器，拔掉接在罐盖上的进水进气快插接口和泵头，取下导热版，将马达传动把手上提，双手提起支架后外移，可取出罐体。再将罐盖上的3个螺栓旋开，取下罐盖将培养基加入，再装回罐盖。

注意：加培养基时需多加少量的水，以平衡灭菌过程的水分散失。建议在加培养基的同时加少量消泡剂，防止暴沸；不打开罐盖，也可以将漏斗置于任意一个开口处，将培养基由漏斗倒入。

1.4. 调整消泡电极高度

松开消泡电极下方的小螺丝（一字螺丝），或是固定环，调节好消泡探头的高度，再将螺丝或固定环旋紧即可。探头下方与液面一般保持3~5cm的距离。

注：该液面是指开启搅拌和通气后的液面。

1.5. 安装pH和溶解氧电极

如果电极过长，则须安装电极适配器（可能有两种）。

将罐盖上相应接口的塞子旋掉。

适配器1：在电极上分别套上：适配器金属环——红色密封圈——白色密封圈（倾斜的一面向上）——黑色密封圈（原来在罐盖的接口内的），确认好电极浸入深度后，将电极适配器的金属环在罐盖上旋紧即可。

适配器2：在电极上分别套上：固定金属环（直接拧紧）——高度调节杆——密封金属环——黑色密封圈（原来在罐盖的接口内的）。持此电极，先将密封金属环在相应接口处拧紧，确认好电极浸入深度后，用配套的内六角将固定金属环固定在高度调节杆上（拧紧顶丝）。

1.6. 安装试剂瓶

将酸、碱、消泡剂等试剂加入到各个试剂瓶中，再将管子接到罐盖的试剂进口，用扎带扎紧，然后把试剂瓶放到支架上，把泵头固定在支架侧面的小孔上。

注意：试剂管子中不能存有试剂。由于挥发性酸、碱或热敏性物质，不可加入试剂瓶与罐体一同灭菌，须单独处理，在罐体灭菌后以无菌操作加入试剂瓶。

1.7. 安装接种口

取下罐盖上的一个塞子和密封圈，放入硅胶隔膜，旋紧固定用适配器，再旋上塞子（塞子不必旋得很紧）。

1.8. 安装采样瓶

将采样瓶的管子和采样管连接好，连接处用扎带扎紧，采样瓶挂于支架上。

1.9. 封口和夹紧

将所有气体进口，用铝箔封好，包括：试剂瓶的滤膜，进气口快插口，搅拌桨接口需用铝箔包裹；pH电极和溶氧电极接口可以用原装螺帽拧紧。将所有没入液面以下的管子引出的软管用止水夹夹紧，包括：通气管子，采样管子，试剂瓶管子。（注：出气口冷却器的滤膜不可密封。）

2. 灭菌和灭菌后安装

2.1. 将组装好的罐体连同支架和试剂瓶一起放入灭菌锅灭菌。

2.2. 灭菌后，待罐体温度降至低于70℃，将罐体和支架放回主机原位上， 将导热块安装回去，拧紧将罐体固定好，再放下搅拌马达传动把手。

2.3. 将所有的铝箔取掉，将pH电极和溶氧电极的螺帽取掉。

2.4. 连接所有传感器：将温度传感器插入至套筒底部，将pH传感器连接线拧紧，将PO2传感器对应接口形状插入并旋转至红色突起可见，将消泡黑色探头插入罐盖的小孔，红色探头插入消泡电极的小孔。

2.5. 将各个蠕动泵的泵头从支架上取下，按照各试剂瓶内所装的溶液，对应酸、碱、消泡、补料插到主机左上相应的位置。用F键进入Minifors主机的泵选项，按菜单键进入每一个蠕动泵的工作模式设定，将每一个蠕动泵的工作模式改为“AUT”（按启动/停止键，可以切换工作模式），同时按“+”键，对应蠕动泵即可手动工作，将试剂瓶中的试剂泵到罐盖接口处。完成该操作之后，将Fed泵的工作模式由“AUT”改为“000”模式。

2.6. 将进气口的快插口插好，出气口冷凝器的进出水口插好。

3. 开启发酵程序和溶解氧电极的校准

3.1. 开机：打开主机的电源开关，开启空压机和气体钢瓶（进气压力为2bar），开启主机进水和出气口冷却器进水。

3.2. 将发酵罐主机的搅拌、温度、pH参数功能开启：按F键切换所选参数，在以上3个参数功能下按启动/停止键“⊙”启动该功能。开启转子流量计到1vvm。

3.3. 启动发酵程序

（1）开启电脑，打开Iris软件，一次点击File→New，选择Labfors 0 后“下一步”，然后在第一个选项中输入此次发酵编号（该编号可以是任意字母或数字），如“E.coli 001”，在第二个选项中选择“inoculation”。

注意：如果需要重复上一次发酵的初始设定进行发酵，可直接在recipe information选项中点选browse, 导入之前完成过的发酵文档。

（2）再点选“下一步”后，选择需要监控的发酵参数，将其移到右边的方框内。并对每个需要控制的参数，输入设定值。输入设定值的方法：单击相应的发酵参数，点选Edit打开其设定对话框，在对话框中将Set point 改为发酵设定值。

（3）再点选“下一步”，再点选“完成”。此时仪器启动发酵程序。

3.4. 校准溶解氧

待温度、搅拌速度、pH的实际值均达到稳定状态，且溶解氧检测值不再变化，即可开始校准溶解氧。校准方法：按功能键“F”进入pO2功能，然后按菜单键“□”到显示Cal，按“+”键选择1，再按启动/停止键“⊙”进入校准过程。然后按“+”/“－”键直接将数值改为100，再按启动/停止键“⊙”确认数值。此时仪器会显示End，pO2校准完成。

4. 接种

将接种口的塞子取下，在接种口内倒入少量酒精，点燃，在点燃期间将已经取好菌液的针筒在火焰上灼烧后，穿刺进硅胶塞，注入菌液，完成后再次倒入少量酒精，点燃灭菌后，将塞子旋上即可。接种后在IRIS软件上点击“针筒”（inoculate）图标，记录接种时刻。

注：酒精点燃也可用医用酒精擦拭代替。

5. 发酵过程控制

除气体流速外，所有发酵参数的控制均为自动完成，只需在软件中更改设定值（set point）即可。消泡（antifoam）无需更改设定值，即可自动工作。

6. 采样

在采样瓶的滤膜处接上针筒，抽吸针筒形成真空，松开采样管的夹子，待菌液被抽出后，将夹子夹紧，可以用无菌操作的方式取掉采样瓶，换上新的采样瓶即可。

注：由于采样管中的菌液与发酵罐中的菌液条件不一致，所以，在每次采样时须先弃掉部分菌液，再进行二次采样，以确保采样的真实性。

7. 停止发酵和清理

8. 查看发酵文档和输出报告

9. 日常维护

9.1. pH电极的维护

9.2. pO2电极的维护

9.3. 密封性和管路的维护

9.4. 搅拌轴承的维护