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标准化流程与成功技术案例

Trans-Blot Turbo与BlotCycler仪器使用流程

发布时间:2017-06-30 16:44:05    阅读次数:2378  

1. 仪器介绍

1.1 Trans-Blot Turbo 转印系统代表了新一代的蛋白转印系统,具有集速度、升级性能和使用便利性于一体的优势,能够提供比现有任何方法更快的结果。 Trans-Blot Turbo转印系统将传统转印技术与现代滤纸以及缓冲液结合一体,能够在最短的制备时间内快速转印蛋白质。通过系统预设,研究人员可以更快更简便地获取可重复的转印结果,这是传统电泳糟和半干转印方法难以做到的。

1.2 Western Blot 属于经验依赖性的多步骤实验,结果的优劣受到多个因素的影响,传统的手工操作容易引入误差,难以保证重复性。BlotCycler是全自动化的Western Blot 洗液工作站,自动化完成封闭、孵育、清洗和一抗回收的一系列工作,很好地解放了劳动力。更为重要的是BlotCycler的清洗可以减少二抗在膜上的附着,降低背景,提高信噪比和相对灵敏度;自动化的操作流程避免了手工操作的误差,保证了批次内和批次间实验的重复性;高通量操作和多条件的设定可以辅助优化Western Blot 实验的条件,例如合适的抗体浓度。该仪器不仅应用于生物科学,还应用于环境科学、医学、药学、免疫学、生物化学等基础研究领域。

下图为仪器图片

IMG_2572.JPG

       Trans-Blot Turbo                  BlotCycler

2. 仪器特点

2.1 Trans-Blot Turbo主要特点:

(1)更快、更高通量的转印:3分钟转印程序--使用Mini-PROTEAN® TGXTM预制胶可以实现3分钟超快速转印实验(分子量范围5-150KD);7分钟转印程序--系统可实现7分钟内完成4块小型胶或者2块中型胶的高效转印实验(分子量范围5-150KD);10分钟转印程序--系统可实现10分钟内完成4块小型胶或者2块中型胶的高分子量范围转印实验(分子量范围25-300KD);

(2)模块化设计:单次运行能够转印1-4块小型凝胶或1-2块中型凝胶;

(3)开放系统,灵活使用:除了快速转印包以外,能兼容传统的半干转印耗材;

(4)各程序运行之间无需冷却期;

(5)可由用户自定义并储存程序。

2.2 BlotCycler 特点:

(1)完全自动化:填充试剂后无需人工操作;

(2)专利的流体技术驱动液体,无需真空泵或空气压缩机等辅助设备;

(3)样品盘大小:10 × 8 cm2,6 个样品盘(每侧3 个),每个样品盘可使用不同的一抗/ 二抗,最多可一次处理12 张膜;

(4)自动回收一抗,可以反复使用10 次;

(5)触摸屏程序编写,可设定多至100 个步骤,每个步骤的参数可调;

(6) 洗涤缓冲液可保留在样品盘内,保持膜的湿润;

(7)开放的系统设计,无需专用的试剂耗材;

(8)关键步骤和程序结束具有声音提示功能;

(9)结构紧凑,占用空间小,仅30.48 × 30.48 cm2

3. 仪器使用流程

(1)准备好待转印胶与膜;

(2)按照图示,放置滤纸-胶-膜-滤纸的顺序,一次放好,赶走气泡;

(3) 依据蛋白质分子量如下表所示,选择适合的程序进行转膜;

(4)仪器主界面进入程序,如下图所示,可以进行自定义程序,也可以选择内设程序进行。

(5)程序结束后,取出膜

(6)在BlotCycler槽中加入洗涤缓冲液,一抗和二抗管中加入6种不同的一抗和二抗;

(7)将转印好的膜放置在样品盘中,加入封闭液,并放置好一抗回收管;

(8)编辑程序并运行,根据自己时间编辑封闭、一抗、二抗和洗膜时间及次数,运行程序。

(9)取出洗好的膜,准备检测