1. 上机前工作

1.1标本处理

参考DNA提取法，或者试剂盒说明书，测定模板浓度，备用。

1.2 PCR反应体系配制

根据试验要求选择上样体积及各项组分的浓度，常见上样体积：20μL 、25μL、 50μL 。

2.上机

2.1开机自检

2.2新建程序

2.2.1程序命名及仪器参数设置

主界面选择PROG →EDIT→ ENTER→ NEW→ ENTER→NEWPROG→选择储存位置 A-E盘→ENTER→程序命名（数字+字母）→ENTER 进入下一界面。

2.2.2预变性

STAGE 01

STEP 01→ 95℃（可变）→ ENTER →5 MIN（可变） →ENTER

STEP 02→ENTER→ ENTER（不进行编辑）

STEP 03 →CYCLE 1（循环次数可变，下同）→HOLD TEMP（不编辑）→ ENTER

2.2.3 PCR反应变性--退火--延伸三个基本循环反应步骤

STAGE 02

STEP 01→TEMP  95℃（可变）→ ENTER → TIME 30S（可变）→  ENTER

STEP 02→TEMP  56℃（可变）→ ENTER → TIME 30S（可变）→  ENTER

STEP 03→TEMP  72℃（可变）→ ENTER → TIME 30S（可变）→  ENTER

STEP 04→ENTER→ ENTER（不进行编辑）

STEP 05→CYCLE 35（可变）→HOLD TEMP（不编辑）→ ENTER

2.2.4 延伸

STAGE  03

STEP 01→TEMP  72℃（可变）→ ENTER →TIME 10min（可变）→  ENTER

STEP 02→ENTER→ ENTER（不进行编辑）

STEP 02→CYCLE 1（可变）→HOLD TEMP（编辑程序完成后的保存温度，一般4℃）→ ENTER

2.2.5 确认程序编辑完成

STAGE  04 不进行编辑，全部→ ENTER，进入下一个界面，结束程序编辑。

2.2.6 保存程序

在此界面保存程序选择SAVE，放弃或删除选择Discard

2.3 保存程序的编辑

主界面选择PROG →EDIT→ ENTER→EXISTING → ENTER→选择程序所在位置（A-E）盘 → 程序名称进行再编辑→ENTER→进入程序编辑界面，编辑方法同“2、新建程序” 完成后选择SAVE或Discard。

2.4运行程序

RUN→ 选择程序保存位置及名称（A-E盘）→ ENTER（3次）进入下一个界面→ 光标“ACTIVE  TUBE”位置通过Previous选择至 “BLOCK”→ENTER至下一个界面 →选择RUN开始运行程序，选择ABORT结束程序

2.5 取出样本，检查仪器后，关机，拔下电源。