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标准化流程与成功技术案例

分子生物学实验室常规试验和仪器操作流程

发布时间:2017-06-30 16:50:08    阅读次数:2051  

1.      玻璃器皿的清洗流程

锥形瓶、平皿、试管、离心管:带菌的固体培养基,枪头取出放入废液盒中,集中加热煮沸,等凝固后倒入垃圾桶;带菌的液体培养基,集中倒入废液盒中,加热煮沸,稍凉后导入水池。试管刷沾取洗洁精清洗,自来水冲洗干净,蒸馏水润洗,晾干。

电泳玻璃板清洗:自来水冲洗两侧碎胶,沾洗洁精手掌搓洗,自来水大量冲洗,蒸馏水正反冲洗,三次,晾干。

2.      高压锅灭菌流程

封口或报纸包好的器皿或配置好的溶液(盖子松开)准备灭菌,先检查高压锅水是否没过铜丝,放入待灭菌物品,时间15-20min,温度121.3℃,放气阀打开,打开开关,当有蒸汽时关放气阀,当音乐响时,关开关,待压力降为0 Pa时,松开盖子,取出物品。

3.      配置试剂pH调节(雷磁)

确定所调待测液pH,采用两点矫正法,若为酸性即用标准液pH 6.86和pH 4.0,若为碱性即用pH 6.86和pH 9.18校准。

洗瓶冲洗探头    滤纸擦干    放入标准液    选择校准键    稳定后按确认键    冲洗干净滤纸擦干    放入待测液

4. 常见溶液配制

     (1)LB培养基

液体  胰蛋白胨 (Tryptone)   10g

        酵母粉(Yeast Powder)        5 g

        NaCl                      10g

        蒸馏水定容至1L

        固体  250mL液体+ 2.8g Agar

 (2)Tris-HCl (母液)  pH 8.0

  1M         0.5M

    Tris         24.228g       2.114g

    浓HCl       8mL         4mL

    定容         200mL       200mL

注意:现将Tris溶于180mL水中,待完全溶解后加入HCl,再调pH值定容。

(3) EDTA母液   pH 8.0

                   0.5M         0.25M

    EDTA          37.224g       18.612g

    NaOH(颗粒)     3.6g          1.8g

    定容           200mL        200mL

注意:此溶液pH值接近8.0时才溶解,最后用稀NaOH调节。

5.      超声破碎仪使用

打开开关    洗瓶冲洗探头    滤纸擦干    探头放入待超液(冰上)    Set键及方向键调节功率及时间    Enter确认    启动超声

注意:超声杆探头不能空载,超声功率可以随时调节

6.      半干转仪及配套电泳仪使用

按照滤纸、膜、凝胶、滤纸的顺序放好,改好安全盖,调节电压(电流)及时间,电泳仪电压不能超过25V。

使用完毕后关闭电泳仪,擦干电极平台。

7.      Sigma 离心机使用

容积               转子型号         最大转速  

1.5mL/2mL          角12110         30.000 rpm / 64.397 x g

10mL               角12111         26.000 rpm / 57.438 x g

50mL               角12150         1.000 rpm / 41.415 x g

80mL               角12155         20.000 rpm / 40.695 x g

96孔板            水平11222         3.000 rpm / 1.238 x g

注意事项:

(1)根据样品体积选择正确的离心转子及转速。

(2)用天平完全配平后再离心。

(3)一定要在达到预设转速后,才能离开离心机,若有任何异状,要立刻停机。

(4)离心机使用完毕后,打开盖子晾干或用软布擦干后再盖上盖子。