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实时荧光PCR仪7300可以进行绝对定量、相对定量、溶解曲线等许多项目。绝对定量是通过样品的Ct 值和标准曲线进行比较实现的。分析的结果是给定数量的样品中（给定数量的细胞，每μg总RNA）中核酸的量（拷贝数、微克）。 相对定量的分析结果是在相当量的试验组（样品 A）和对照组（样品 B）中一个靶基因的相对比率（倍数差异）。科研人员更多利用相对定量检测mRNA的相对含量以比较两者或多者之间的表达差异。
1. 实验前准备
1.1 实验前必须准备：
稀释好的cDNA样品（10倍稀释）、引物（浓度由试剂盒定）、一次性的无尘手套、可刻录光盘（CD、DVD），对应试剂盒等。
选择内参。同一个体的不同样本可用同一个内参对照；不同个体的样本必须单独带内参对照。
实验前需进行板布局设计、加样顺序等操作预练。
1.2 预实验
正式试验之前的预实验，若扩增效率不一致，则需要重新调整体系，设计引物等。相对定量CT值比较法尚需目的基因与内参基因的扩增效率一致，因此，目的基因与内参基因的扩增效率一致性验证成为实验方法是否成功建立的一项最重要的条件。这就需要在正式实验前优化反应体系和反应条件。（注：绝对定量必须做 ）
按照实验前板布局设计和加样顺序加样，需加入ROX试剂进行校正。ABI7300需要阳性参比荧光校正，由于加样操作的误差、离心管透光性能的差异、荧光激发效率的差异等偶然误差。
2. 程序编辑
循环参数的修改方法：
在想删除的Step中双击，该步骤被选中变黑，按Delete键即可删该步骤。在需要插入参数的位置点击，出现粗黑竖线后，按需要点击Add Hold、Add Cycle或Add Step按钮添加保温、循环或循环中的一个步骤。对于修改温度和时间，用鼠标选中需要修改的温度或时间数字，输入新的数值即可。
定量PCR的标准反应体积是50 μL，根据试剂需要修改。如果想修改的话建议大于25 μL。
*在相对定量中，加入溶解曲线步骤为灰色不可选，做溶解曲线只能去主菜单新建。
3. 加样：以上编好后进行加样，加样时注意：A1孔位一定要在进板架的左上。
4. 开始： 启动扩增 点Save按钮保存文件设置。确认96孔板在主机内放置妥当后，点击Start按钮，开始PCR循环。屏幕上动态显示PCR进程和剩余时间。仪器运行中可以查看。
4.1 界面介绍: 左上plate页面、左下Spectra页面、右上Component页面、右下扩增曲线页面
扩增曲线：在默认的设置中，PCR扩增曲线图谱的纵坐标代表经过ROX和空白校正后的相对荧光信号强度，横坐标代表PCR循环次数，从1到40，纵坐标以对数表示，横坐标以线性表示。如果要看完全线性的S形图谱请双击纵坐标轴线打开坐标设置窗口将纵坐标改成线性形式。
Component页面和Spectra页面：察看原始数据。
Component显示的是信号强度随时间(即PCR循环次数)的变化是纵向的
Spectra显示的是每个PCR循环点上信号强度在不同波长上的分布，也就是在4个滤色片上的分布，是横向的。
plate页面 每个孔位显示的是孔名称、任务、校正后报告荧光强度。
数据分析：进入管理界面后，首先点工具栏中的绿色三角，以使SDS软件分析数据。左上窗口为探针管理、左下窗口为你选中的探针下的样本、右侧窗口为数据分析
数据分析窗口包含3个选项卡：plate、扩增曲线、基因分析
数据：由仪器给出条形图，很多时候给出的结果并不符合实验者的要求，这就需要将数据导出，经过处理后用专业统计软件处理。
4.2 7300相对定量使用的方法是ddCT法，无法选择别的方法。
导出CT值后需要计算dCT值和ddCT值,而导出的CT值还可以进行统计分析。
4.3 开始介绍流程时提到相对定量ddCT法的前提是假设目的基因与内参基因的扩增效率一致，因此，目的基因与内参基因的扩增效率一致性验证成为实验方法是否成功建立的一项最重要的条件。
目的基因和参照基因扩增效率都接近100％，且相对偏差不超过5 ％
5. 溶解曲线试验：点击add dissociation stage按钮加做溶解曲线试验。
板架布局同刚做完的相对定量试验
6. 数据分析：实验完毕后电脑可以不关，分析刚得到的实验数据。软件给出的结果、可能不符合你的要求，需要导出自己统计验证。
7. 注意事项：
（1）实验中必须注意：加样前先打开电脑编辑运行程序（可不开7300主机），加样严格按照设计的程序加。仪器运行中建议全程监控。
（2）实验后必须注意：数据和程序转移必须使用刻录光盘，不可使用U盘，一旦染毒7300sds软件将无法运行或运行中途死机造成损失。
（3）如果还没有加样仅仅是编辑程序，可以先不开7300主机，编辑程序后保存退出。待加完样后先开7300主机，再启动sds软件，读取刚才编好的程序，运行。
（4）再次强调禁止用U盘等移动存储器，只能使用一次性存储设备。