细胞冻存操作步骤： 

1.选择处于对数生长期并铺满瓶底的贴壁细胞，去掉培养瓶中上清液，加入胰蛋白酶EDTA消化液，待细胞收缩为圆形时倒掉消化液，加入1mL细胞冻存液（0.9mL小牛血清+0.1mL二甲基亚砜）。用吸管反复吹打瓶壁细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮细胞不需要消化处理一步。

2.将细胞悬液移至冻存管中。

3.将冷冻管盖子盖紧，并标记好细胞名称、冻存日期和操作人名字。 

4.将装好冻存管装入沙布袋内；置于液氮容器颈口处存放4h左右，移入液氮提篮中。

5.细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，最好取出一株细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。