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标准化流程与成功技术案例

BMMSCs 表面标志物的鉴定

发布时间:2019-01-07 15:25:11    阅读次数:16367  

将第 4 代细胞培养液弃除,PBS 润洗 1 次,加入 2 mL 胰蛋白酶对细胞进行消化,并于镜下察看细胞回缩后用培养基迅速阻止消化。将多次重复吹打所得悬液装至无菌离心管中,室温条件下离心弃上清,随后 PBS 浸洗,并重复 2 ~3 次。细胞重悬计数并均匀移至无菌离心管中,密度均为 1 ×107mL-1,每管为 250 μL。前4 管依次加入 CD90-PE-CyTM7 抗 体 25 μL、CD45-FITC 抗体 10 μL、CD29-PE 抗体 25 μL 和 CD90-PE-CyTM7 抗体 25 μL + CD45-FITC 抗体 10 μL + CD29-PE 抗体 25 μL,最后 1 管加入 PBS 做对照,4 ℃ 避光孵育,30 min 后室温离心,PBS 润洗 1 次; 再次离心,弃上清,加入 500 μL PBS,5 支管均进行细胞重悬。最后用流式细胞仪对以上 3 种抗体进行检测。