将第 4 代细胞培养液弃除，PBS 润洗 1 次，加入 2 mL 胰蛋白酶对细胞进行消化，并于镜下察看细胞回缩后用培养基迅速阻止消化。将多次重复吹打所得悬液装至无菌离心管中，室温条件下离心弃上清，随后 PBS 浸洗，并重复 2 ～3 次。细胞重悬计数并均匀移至无菌离心管中，密度均为 1 ×10⁷mL^-1，每管为 250 μL。前4 管依次加入 CD90-PE-Cy^TM7 抗 体 25 μL、CD45-FITC 抗体 10 μL、CD29-PE 抗体 25 μL 和 CD90-PE-Cy^TM7 抗体 25 μL + CD45-FITC 抗体 10 μL + CD29-PE 抗体 25 μL，最后 1 管加入 PBS 做对照，4 ℃ 避光孵育，30 min 后室温离心，PBS 润洗 1 次; 再次离心，弃上清，加入 500 μL PBS，5 支管均进行细胞重悬。最后用流式细胞仪对以上 3 种抗体进行检测。