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标准化流程与成功技术案例

样品中蛋白质测定的实验流程

发布时间:2019-01-07 15:26:17    阅读次数:18330  

一、仪器

凯氏定氮仪,石墨消解仪,分析天平,中药粉碎机

二、试剂

1. 将蒸馏水加入到蒸馏水桶(带有蓝色H2O标签)内, 并将桶盖拧紧。

2. 配制40%的NaOH溶液,加入到碱液桶(带黄色NaOH标签)内,并将桶盖拧紧。

3. 根据实验需要配制甲基红-溴甲酚绿混合指示剂溶液。溴甲酚绿0.1克, 甲基红0.1克分别溶于95%乙醇中,混合后稀至100毫升。

4. 配制2%硼酸(H3BO3)溶液,然后按100:1的比例加入甲基红-溴甲酚绿混指示剂,混合均匀,加入到硼酸桶(带红色H3BO3标签)内,并将桶盖拧紧。

5.0.1000mol/L硫酸溶液:取10ml 浓硫酸缓慢加入到174ml 的蒸馏水中(边加边摇动)。

三、样品预处理
 1.烘干:取适量样品放入真空干燥箱内60℃-65℃烘干8小时。
 2.粉碎:取适量已烘干样品用中药粉碎仪粉碎,过40目筛。
四、石墨消解
1.称取1g (精确至0.0001)已粉碎过筛的样品(每个样品称取3份),分别放入消化管中,每个消化管中加入一片催化剂(或硫酸铜:硫酸钾=1:15,硫酸铜0.2g ,硫酸钾30g),浓硫酸8ml ,轻轻摇动使混合均匀,同时做空白管。
2.消化管架放置在石墨炉上,盖上废气罩,打开水射真空泵,连接废气吸收系统。

3.设置消化炉参数:消化采用直线升温模式,420℃维持120min。消化完成后,取出消化管,冷却至室温。
五、蒸馏滴定:
1.蒸馏:将消化管放置在凯氏定氮仪相应位置,设置仪器参数:蒸馏水15ml,2%硼酸溶液25ml ,碱溶液35ml,蒸馏5分钟。
2.滴定:蒸馏好的样品用0.1000mol/L硫酸溶液滴定至指示剂由蓝绿色变为灰紫色为终点。记录所用滴定液体积,按下列公式计算蛋白质含量:

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