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标准化流程与成功技术案例

大豆异黄酮的液相色谱检测标准流程

发布时间:2017-06-30 16:55:51    阅读次数:667  

1仪器:HP1100液相色谱仪,超声波清洗仪,分析天平(1/10万),高速离心机,10mL容量瓶,0.45微米滤膜。

2试剂:

2.1甲醇:色谱纯

2.2乙腈:色谱纯

2.3磷酸

2.4二甲基亚砜

2.5 80%甲醇:80mL甲醇加纯净水20mL混匀即可。

2.6 PH3.0的磷酸水溶液:596mL哇哈哈纯净水加100微升磷酸即可。

2.7 50%二甲基亚砜溶液:50mL二甲基亚砜加纯净水50mL混匀即可。

2.8大豆异黄酮标准品储备液的配制:精密称取一定量的大豆苷、染料木素、黄豆黄苷、大豆苷元标准品于10mL容量瓶中,加入50%的二甲基亚砜溶液至接近刻度,超声处理30分钟,再用50%的二甲基亚砜溶液定容。

2.9大豆异黄酮混合标准使用液:将配制好的大豆苷、染料木素、黄豆黄苷、大豆苷元标准品储备液等量混合后,再做倍比稀释成不同浓度的混合标准使用液。

3样品处理:

3.1固体、半样品:固体样品粉碎磨细,过80目筛,混匀。半固体样品混匀。称取0.05-0.5克,放入50mL容量瓶中加80%甲醇溶解后定容至接近刻度。

3.2液体样品:吸取混匀的液体样品0.5mL-5.0mL于50mL容量瓶中,加80%甲醇溶解后定容至接近刻度

3.3将上述样品超声振荡20分钟,用80%甲醇定容至刻度,混匀。取样品溶液于离心管中,10000转/分,离心15分钟,上清液过0.45微米滤膜备用。

4样品测定

4.1色谱条件

色谱柱:C18 ODS-2(4.6mm×150mm,5um),流速:1mL/min    波长:260nm   柱温:30℃

流动相:A乙腈   B磷酸水溶液(PH3)   进样量:20µL

梯度洗脱表

时间

乙腈

磷酸水溶液(PH3)

0

12

88

10

18

82

23

24

76

30

30

70

35

40

60

40

12

88

4.2测定:

4.2.1定性:分别将大豆苷、染料木素、黄豆黄苷、大豆苷元的标准储备液做10倍稀释后按上述色谱条件(4.1)进行测定,依据单一标准品的保留时间,对样品中的组分进行测定。

4.2.2定量:将大豆异黄酮混合标准使用液(2.9)在色谱条件(4.1)下进行测定,以峰面积为纵坐标、标准品的含量为横坐标做标准曲线,由标准曲线得出样品组分的含量。

5精密度:在重复条件下,两次独立测定结果之差不得超过算术平均值的10%。