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标准化流程与成功技术案例

免疫组化操作步骤

发布时间:2017-06-30 16:56:19    阅读次数:658  

一.免疫组化 ( 三步法 ) 操作步骤 :

(1) 石蜡切片脱蜡至水。

(2) 3%H 2 O 2室温孵育5-10分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。

(3) 蒸馏水冲洗,PBS 浸泡5分钟×2 (如需抗原修复,可在此步后进行)。

(4) 5-10% 正常山羊血清( PBS 稀释)封闭,室温孵育10分钟,倾去血清,勿洗。滴加一抗工作液,37 ℃孵育1-2小时或4℃过夜。

(5) PBS冲洗,5分钟×3 次。

(6) 滴加适量生物素标记二抗工作液,37℃ 孵育30 分钟。

(7) PBS 冲洗,5 分钟 ×3 次。

(8) 滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液,37 ℃孵育30 分钟。

(9) PBS 冲洗,5分钟×3 次。

(10) 显色剂显色 3-15 分钟(DAB或NBT/BCIP )

(11) 自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片。

二. 冰冻切片免疫组化染色步骤:

   冰冻切片 4-8μm ,放置-20℃备用,PBS洗,5分钟×3次,用过氧化氢孵育5-10分钟,消除内源性过氧化物酶的活性。以下同石蜡切片免疫组化。