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标准化流程与成功技术案例

细胞的复苏

发布时间:2017-06-30 16:58:20    阅读次数:349  

1.细胞复苏的原则

 在实际操作中,冻存细胞要进行复苏,再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。

2.细胞复苏的操作步骤 

2.1从液氮罐中取出冷冻管。 

2.2迅速放入37~40℃水浴中,并不时摇动,在1min内使其完全融化。

2.3在1000r/min速度下离心7min,弃去上层液,加入适量培养液后接种于培养瓶中,置37℃温箱静置培养,次日更换一次培养液,继续培养,观察生长情况。若细胞密度较高,及时传代。

3.注意事项 

在细胞复苏操作时,应注意融化冻存细胞速度要快,可不时摇动冷冻管,使之尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。这样复苏的冻存细胞存活率高,生长及形态良好。然而,由于冻存的细胞还受其他因素的影响,有时也会有部分细胞死亡。此时,可将不贴壁、飘浮在培养液上(已死亡)的细胞轻轻倒掉,再补以适量的新培养液,也会获得较为满意的结果。