本设备主要特点：

1、定量检测：绝对定量（病原体检测，转基因食品检测，基因表达研究）；

            相对定量（基因在不同组织中的表达差异，药物疗效考核）。

2、点突变检测：与疾病相关的等位基因点突变检测；SNP检测。

ABI 7300 Real Time PCR System 实时荧光定量PCR操作规程

一、仪器开/关机程序

1、开机程序

1.1打开电脑，进入桌面。

1.2打开PCR仪器的电源开关（注：该仪器有两个电源开关，一个控制PCR仪，一个控制光源系统）。

1.3双击桌面上的软件图标，点击“yes”，进入软件的主菜单。

2、关机程序

2.1保存数据，退出软件的主菜单。

2.2关掉电脑，关闭PCR仪器的电源开关。

二、程序文件的设置及打开

1、实验程序已预先设定

1.1点击软件左方主目录中的“Library”，进入该界面后。

1.2选择“View Protocol”页面，根据路径，找到预存的程序文件。

2、创建新的程序文件

2.1点击软件左方主目录中的“Workshop”，进入该界面。

2.2选择“Edit Protocol”页面，输入相应的温度、时间、重复的循环数（Repeats），增加或删除步骤（Cycle和Step），在“Select data collection step（s）”中选择需要进行荧光收集的步骤。

2.3完成后，在“Protocol Filename”中输入程序的文件名，点击“Save this protocol”。

三、仪器操作程序

1、编辑样本

1.1将装有反应液的PCR反应管放入PCR仪，记录样本摆放顺序。

1.2点击进入软件左方主目录的“Workshop”界面，选择“Edit Plate Setup”页面。

1.3点击“Samples：Whole Plate loading”，根据样本摆放的顺序和样本属性，选择相应的图标（Unknown和Standard），在plate上相应位置作标识，是标准品（Standard）的，在屏幕右下方的“Standard Quantity”中输入相应浓度。

1.4点击“Select and load fluorophores”，在“1. or deselect a fluorophore”中选择荧光标记，在“2.Assign a color”中选择该标记相对应的颜色，然后在plate上对1.3所选择的孔位进行荧光标记。

1.5完成后，在“Plate Setup Filename：”中输入样本文件的文件名，点击“Save this plate setup”。

2、运行

2.1编辑样本完成后，在该页面下点击“Run with selected protocol”。

2.2转入“Run Prep”页面，确认“Select run purpose”所选的是“PCR Quantification Melt Curve”和“Select well factor source”所选的是“Experimental Plate”，核对一下“Selected Protocol”和“Selected Plate”的文件名是否正确。

2.3然后在“Sample volume”中输入反应体系，点击“Begin Run”，在弹出的对话框中输入要保存的数据文件名称，点击保存。

3、数据分析

3.1点击软件左方主目录中的“Library”，进入“View Post-Run Data”页面。

3.2找到并选中要分析的数据文件，点击“Analyze Data”，转入“Data Analysis”界面。

3.3根据“baseline”和“Threshold”分析原则，进行数据分析，观察PCR Standard

      Curve”。